鬼筆環肽-熒光素標記

這種綠色熒光鬼筆環肽綴合物（相當于FITC標記的鬼筆環肽）會選擇性結合F-肌動蛋白。鬼筆環肽衍生物經常以納摩爾濃度使用，常在甲醛固定和透化的組織切片、細胞培養或無細胞實驗中用于標記、鑒定和定量F-肌動蛋白的便捷探針。

操作步驟

1.制備1000 X鬼筆環肽DMSO儲備液：將30μLDMSO加入小瓶中。

2.制備1X鬼筆環肽結合物工作溶液：加入1μL1000X鬼筆環肽結合物DMSO溶液至1mL含1％BSA的PBS中。

注意1：鬼筆環肽結合物未使用的1000X DMSO儲備溶液應等分并儲存在-20℃，避光。

注意2：不同的細胞類型可能染色不同。鬼筆環肽結合物工作溶液的濃度的制備需要根據實際而定。

3.染色細胞：

3.1執行甲醛固定，在室溫下將含3.0-4.0％甲醛的細胞在PBS中孵育10-30分鐘。

注意：避免使用任何含甲醇的固定劑，因為甲醇會在固定過程中破壞肌動蛋白。 優選的固定劑是不含甲醇的甲醛。

3.2用PBS沖洗固定細胞2-3次。

3.3可選：在PBS中加入0.1％Triton X-100固定細胞（步驟2.2）3至5分鐘，以增加滲透性。 用PBS沖洗細胞2-3次。

3.4將100μL/孔（96孔板）鬼筆環肽綴合物工作溶液（來自步驟1）加入固定的細胞（來自步驟2.2或2.3）中，并在室溫下染色細胞20至90分鐘。

3.5在加上蓋玻片之前，用PBS輕輕沖洗細胞2至3次以除去過量的鬼筆環肽結合物，然后在顯微鏡下進行，密封和成像。